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鄭伊健1967年生於香港，祖籍廣東恩平。1986年，他考進電視廣播有限公司藝員訓練班，期間拍攝飲品廣告而嶄露頭角。1987年他參加新秀歌唱大賽落選，同年演出首部電視劇《鐳射青春》（1987），並憑《燃燒歲月》（1990）、《蜀山奇俠之仙侶奇緣》（1991）漸為觀眾熟悉。1991年，他簽約博德曼音樂（香港）唱片公司，開始涉足樂壇。1992年，他接拍第一部電影《應召女郎1988之二現代應召女郎》，後為王晶羅致，演出《超級學校霸王》（1993）、《新英雄本色》（1994）、《廟街故事》（1995）等。1996年，他主演劉偉強執導、改編自漫畫的《古惑仔之人在江湖》，締造逾二千一百萬港元票房佳績，他演繹的黑幫人物陳浩南深受觀眾歡迎，躍登新一代銀幕偶像；他先後演出六集「古惑仔」系列，並於2018年與該系列班底合演《黃金兄弟》。此外，他與鄭秀文主演改編自漫畫的愛情片《百分百感覺》（1996）與《百分百啱FEEL》（1996），皆票房報捷，晉身具叫座力的男星之列。自1997年起，他先後與嘉禾電影（香港）有限公司及中國星集團有限公司簽訂演員合約，期間主演改編自漫畫的《風雲雄霸天下》（1998）與《中華英雄》（1999），演繹漫畫人物聶風與華英雄，多年後再演出《風雲II》（2009）。其主演的賣座電影還有《幻影特攻》（1998）、《決戰紫禁之巔》（2000）等。千禧年後，他演出動作片《東京攻略》（2000）、《暗戰2》（2001）、《三岔口》（2005），喜劇片《我老婆唔夠秤》（2002），詭異片《阿孖有難》（2004）及文藝片《親密》（2009）；並在《九龍冰室》（2001）、《天行者》（2006）及《飛砂風中轉》（2010）飾演意欲退隱的黑道中人。2008年，他憑《第一誡》（2008）獲第12屆富川國際奇幻電影節最佳男主角，與余文樂同獲影帝。其他作品有《忠烈楊家將》（2013）、《分手100次》（2014）、《全力扣殺》（2015）、《三國殺·幻》（2018）等。